久在草影院-久在草视频-久月婷婷-久伊人网-久视频在线观看久视频-久视频在线

技術文章您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術文章 > NK細胞的殺傷活性檢測
NK細胞的殺傷活性檢測
更新時間:2016-01-04   點擊次數(shù):1943次

(一)原理

   以NK細胞為例。將待測者外周血中的NK細胞與靶細胞(K562細胞)按一定比例混合培養(yǎng)一定時間,NK細胞作用于靶細胞,使靶細胞被殺死、破壞,進而使靶細胞線粒體內(nèi)的乳酸脫氫酶釋放出來.使底物發(fā)生顏色變化,其顏色深淺與酶的釋放量成正比,檢測顯色后的光密度OD值,便可推算出NK細胞的殺傷活性。

(二)材料

1.待檢者肝素抗凝血,靶細胞為K562細胞。

2.RPMI 1640培養(yǎng)液、淋巴細胞分離液。

3.酶標儀、離心機。

(三)方法

1.用含5%小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液將靶細胞調(diào)整到5×104~2×105/ml,此濃度需根據(jù)情況預先標定。

2.取待檢者肝素抗凝血3~5ml,經(jīng)淋巴細胞分離液分離單個核細胞,為效應細胞。

3.在96孔圓底細胞培養(yǎng)板中加入靶細胞,每孔加100μl。3個效應細胞自然釋放對照孔不加靶細胞.只加100μl培養(yǎng)液。

4.向各孔加:100μl效應細胞,效應細胞與靶細胞的比例根據(jù)要求而定,通常為5:l~20:1。自然釋放孔不加效應細胞只加100μl培養(yǎng)液,zui大釋放孔中加100μl1%NP40。每個實驗設3個復孔。

5.置37℃5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4~6h。

6.離心培養(yǎng)板1000r/min離心10min。每孔吸出150μl上清液.對應加入另一塊96孔酶聯(lián)檢測板中。向第二塊板每孔依次加20μl O.4mol/L乳酸溶液、20ml 4mmol/L 2一p一碘苯酯一3一p一氯化硝基苯四唑,20μl反應液[含O.03%BSA.2.7U/m1硫辛酰胺脫氫酶.4.5mmol/L氫化型輔酶I(NAD+ ),1.2%蔗糖的PBS],室溫中放置20min。

7.在酶聯(lián)檢測儀上測定各孔的光密度(OD值),檢測波長492nm,參考波長650nm;

 

化工儀器網(wǎng)

推薦收藏該企業(yè)網(wǎng)站
主站蜘蛛池模板: 九九99九九精彩 | 乌克兰bbw | 欧美成人中文字幕在线看 | 邪恶肉肉全彩色无遮琉璃神社 | 欧美交换乱理伦片120秒 | 日韩专区在线观看 | 车上小婕子系列辣文小说 | 日本视频在线免费观看 | 大学生宿舍飞机china free | 7mav视频| 国模娜娜一区二区三区 | 欧美日韩国产手机在线观看视频 | 午夜DV内射一区区 | 91精品国产综合久 | 被夫上司侵犯了中文字幕 | 免费观看国产视频 | 女同志freelesvoices | 日韩一级精品视频在线观看 | 国内精品91久久久久 | 日本亚洲娇小与黑人tube | 成年人免费在线看 | 啊啊啊好大视频 | 免费特黄一级欧美大片在线看 | 苍井空50分钟无码 | 好湿好紧太硬了我太爽了网站 | 亚洲午夜久久久久国产 | 日本暖暖在线视频 | 午夜勾魂曲 | 久久re视频精品538在线 | 成人免费播放器 | 2020韩国r级理论片在线观看 | 青草国产在线观看 | 国产盗摄女厕美女嘘嘘 | 国产va免费精品高清在线观看 | 娇喘高潮教室h | 91国内在线国内在线播放 | 无人区在线观看免费完整版免费 | 好大好硬好深好爽想要之黄蓉 | 亚洲午夜性春猛交xxxx | 国产91精选在线观看麻豆 | 国产精品毛片va一区二区三区 |