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病毒轉化細胞實驗
更新時間:2015-11-13   點擊次數:1745次

病毒轉化細胞實驗

(1)原理:很多病毒都有轉化細胞的作用,尤以致癌病毒zui為明顯。EB病毒(EBV)是近年來常用于轉化細胞的病毒。該病毒對人二倍體細胞的轉化效果,常用于建立淋巴細胞永生細胞系。人外周血B淋巴細胞膜上有。EB病毒受體,當EB病毒與受體結合后,B淋巴細胞可發生轉化,成為體外長期傳代生長的細胞系。

(2)材料

1)病毒:EB病毒液(取自培養的B95—8細胞)。

2)轉化細胞:檸檬酸或肝素抗凝人外周血。

3)細胞培養液:含20%胎牛血清的RPMI 1640。

4)抗生素:青霉素、鏈霉素和慶大霉素。

5)洗液:PBS。

(3)方法

1)血液制備:抗凝全血1~2ml,分裝于15ml離心管中,每管O.5ml,置于4℃冰箱中放置30min后,加入不含血清的RPMI1640離心洗一次,用含20%胎牛血清的細胞培養液制成細胞懸液。

2)EB病毒的獲得:培養的B95—8細胞,10000r/min離心15min去除細胞碎片,再經24000r/min,離心90min獲得病毒沉淀,以1:100體積培養液溶解獲得EB病毒濃縮液。

3)EB病毒轉化:加入EB病毒液,O.3~0.5ml/管,37℃水浴30min~2h,并不時搖動,以利于病毒吸附和并防止血凝塊產生。

4)分裝入50ml培養瓶中,同時補加培養液,5ml/管,置入含5%CO2的37℃溫箱中培養。

5)細胞培養一周后再補入2ml培養基。

6)每3~4d加液或半量換液,隨細胞數量增多,可分裝人大瓶中培養。為了提高轉化效率,常將全血凍存復蘇后采用。

(4)結果觀察與鑒定:需每天鏡檢培養物,開始培養時,鏡下可見大量紅細胞,難以觀察到單核細胞。培養5~7d后,單個或成團的淋巴細胞增殖迅速,成大團塊,呈懸浮生長,紅細胞已*消失,轉化完成。

 

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