在成功獲取并培養了人咽鱗癌細胞FaDu細胞后,接下來進入實驗操作的核心階段。首先,我們需要對細胞進行傳代處理,以確保實驗所需細胞量的充足及細胞活力的維持。具體操作如下:
1. **準備培養基與試劑**:確保新鮮的培養基(如RPMI-1640培養基)已預熱至37℃,并含有10%胎牛血清及必要的抗生素(如青霉素和鏈霉素),以防污染。同時,準備胰蛋白酶-EDTA溶液用于細胞消化。
2. **細胞消化**:在顯微鏡下觀察FaDu細胞生長情況,當細胞密度達到約80%-90%時,吸去舊培養基,用無菌PBS輕輕洗滌細胞兩次,以去除殘留的培養基和死細胞。隨后,加入適量預溫的胰蛋白酶-EDTA溶液,覆蓋細胞表面,放入37℃、5% CO?培養箱中孵育約3-5分鐘,直至細胞間隙增大,形態變圓。
3. **細胞收集與重懸**:輕輕拍打培養皿底部,使細胞脫落,加入等體積的新鮮培養基終止胰酶作用,用移液槍輕輕吹打細胞懸液,確保細胞充分分散成單個。
4. **細胞計數與接種**:取少量細胞懸液進行計數,根據實驗需求調整細胞密度后,將適量的細胞懸液接種到新的培養皿或培養板中,輕輕搖晃使細胞均勻分布,然后放回培養箱中繼續培養。
5. **后續處理**:根據實驗目的,FaDu細胞可用于多種實驗,如藥物敏感性測試、基因編輯、信號通路研究等。在接下來的步驟中,可能需要對細胞進行轉染、加藥處理或收集細胞進行分子生物學分析。每一步操作都需嚴格遵循無菌原則,確保實驗結果的準確性和可靠性。
通過以上步驟,我們成功完成了FaDu細胞的傳代與基本處理,為后續深入研究奠定了堅實的基礎。